提叶片DNA产量低问题

问题:

        用CTAB法抽提的,CTAB和DTT(二硫苏糖醇)混合后加入磨碎的叶子中,65度30分,后用氯仿/异戊醇去蛋白,吸上清加异丙醇,但没有看见DNA,叶子的量很多,取的是四叶期最老的叶子。为什么?

回答:

        老叶子破壁困难,DNA难以释放出来。

1)尽量磨细叶片,最好用液氮反复几次研磨为粉末状;
2)延长CTAB的作用时间,期间不时摇匀。

        也可能由于叶子量太大,而CTAB量少,导致得到的液体粘稠,无法混匀,细胞破裂不完全,DNA少;可试着用大的离心管,多加入CTAB,65度温浴并不时地摇匀。