三种蛋白检测法比较

问题:

        BCA法、Coomassie法、Lowery法的综合比较

回答:


BCA

Coomassie法(又称Bradford法)

改进型Lowery法

检测原理

碱性条件下,Cu2+与蛋白作用生成的Cu1+与BCA形成紫红色络和物,562nm检测

Coomassie与蛋白质四级结构、特殊氨基酸结合,由棕色变成蓝色,595nm检测

Cu2+与蛋白作用生成的Cu1+与双缩脲试剂形成蓝色络和物,菲林试剂增强蓝色形成,562nm检测  

检测范围

BCA:20~2000μg/ml

Micro   BCA:0.5~20μg/ml

100~1500μg/ml

1~1500μg/ml

优点

·比Lowery法更快速,   更易操作

·蛋白质间差异性比Coomassie小,线性非常好

·适合变性剂存在下的蛋白质定量,如膜蛋白

·方法灵活,不同方法有不同的检测范围

·Micro BCA适合变性剂存在下的微量蛋白定量

·适合高通量的多孔板检测  

·可检测变性剂、还原剂存在下的蛋白样品

·速度最快

·易用,不用稀释、透析样品;

·稳定的终点法

·适合高通量的多孔板法检测  

·稳定

·比Coomassie更准确

·比Coomassie蛋白间差异更小

·稳定的终点法  

缺点

·受还原剂、金属离子鳌和剂干扰  

·颜色反应开始10分钟内测完

·蛋白间差异性大  

·线性范围小  

·受还原剂、金属离子鳌剂干扰;步骤烦琐

·不适合多个样品同时处理