​回收后的片段问题

问题:

        回收后的片段无法用于后续实验,如连接等。

回答:

        可能有以下几个原因: 1. 洗脱产物含有残留的乙醇。洗脱时硅胶膜或硅胶树脂上有漂洗缓冲液残留,会使洗脱产物中含有乙醇,影响下游操作。请确保彻底去除漂洗缓冲液,在洗脱前可通过再次离心或置于50℃烤箱中5-10分钟。 2. 洗出液中污染有琼脂糖。凝胶未全部溶解。 3. 洗脱产物含有ssDNA,表现为在琼脂糖电泳上呈小弥散带。将洗脱产物95℃加热 2 min,慢慢冷却到室温,使单链DNA重新退火复性即可。